Uue koroonaviiruse PCR-i tuvastamise põhiprotsess
1. Proovide kogumine: ülemiste hingamisteede (sh ninaneelu ja orofarünks) ja alumiste hingamisteede (sh röga, hingetoru aspiraadi või bronhoalveolaarse lavaaživedeliku) proovide samaaegne kogumine nCoV tuvastamiseks RT-PCR-i abil. Kui alumiste hingamisteede proovid on kergesti kättesaadavad: kasutage proovide kogumiseks sobivaid isikukaitsevahendeid (pange tähele URT-proove piiskade ja kokkupuute ettevaatusabinõude jaoks ning LRT-proove õhupõhiste ettevaatusabinõude jaoks) URT-proovide kogumisel kasutage viiruseproovide võtmise tampooni (puuvilla asemel steriilne polüestriline või rayon) ja viiruse transpordivahendit. Ärge võtke proove ninasõõrmetest ega mandlitest. Kahtlustatavate nCoV-patsientide, eriti kopsupõletiku või raskete patsientide puhul ei saa üks URT-proov diagnoosi välistada ning soovitatav on suurendada URT- ja LRT-proove.
2. Nukleiinhappe ekstraheerimine: nukleiinhappe ekstraheerimisvahend või manuaalne nukleiinhappe ekstraheerimine
1), ei ole vaja vahendeid, kasutada käsitsi ekstraheerimist
Nukleiinhappe ekstraheerimiseks ja proovide isoleerimiseks vajalikud seadmed ja laboritarbed:
bioloogilised ohutuskapid (funktsioonid: proovide eraldamine, personali varustamine, proovid ja keskkonnakaitse),
Lauaarvuti kiire külmutustsentrifuug (funktsioon: kiirus ≥ 12000RPM, nukleiinhappe analüüs jne),
Madala temperatuuriga külmik (funktsioon: reaktiivi ladustamine),
Metallist vann, pipett (funktsioon: täpne annustamine),
Steriliseeritud tsentrifuugitorud (funktsioon: nukleiinhapete eraldamine jne),
Latekskindad (funktsioon: reostusvastane),
Absoluutne etanool, isopropanool, DNaasi ja RNase vaba vesi (vesi, mida ei töödelda DEPC-ga).
3. Automaatne nukleiinhappe ekstraheerimisvahend: (automaatne ekstraheerimine, 32 proovi saab ekstraheerida üks kord 26 minuti jooksul)
Sobiv eelinstallitud plaat laaditakse otse ja ekstraheeritakse otse masinale:
4. Fluorestsentsi kvantitatiivne PCR-tuvastamine:
Vajalikud seadmed ja tarbekaubad: bioloogiline ohutuskapp (funktsioon: proovide ettevalmistamine, personali pakkumine, proovid ja keskkonnakaitse),
Fluorestsentsi kvantitatiivne PCR-instrument (funktsioon: PCR võimenduse tuvastamine ja analüüs),
Lauaarvuti kiire külmutustsentrifuug (funktsioon: kiirus ≥ 12000RPM),
Madala temperatuuriga sügavkülmik (proovide ladustamine temperatuuril -86 °C, reaktiivi ladustamine temperatuuril -20 °C ja 4°C),
ostsillaator, (segu)
Astmelised pipeti näpunäited (funktsioon: täpne laadimine), 1-10ul Suurus
Steriliseeritud tsentrifuugitorud (0,5/1,5/2ml),
0,2ml optiline hinne PCR toru / plaat (funktsioon: PCR reaktsioonitoru),
Latekskindad (funktsioon: reostusvastane).
Nukleiinhappe ekstraheerimine, reaktsioonisüsteemi konfiguratsioon ja tulemuste tõlgendamine sõltuvad komplekti juhistest.