Rakukultuuri sööde peab sisaldama piisavalt toitaineid, et rahuldada biokeemiliste reaktsioonide, näiteks uute rakkude sünteesi ja rakkude metabolismi jaoks vajalikke aineid ja energiat. Rakukultuurisöötme põhikomponendid on vesi, aminohapped, vitamiinid, süsivesikud, anorgaanilised soolad ja muud abitoitained. Seetõttu peame igapäevastes katsetes pöörama tähelepanu rakukultuurisöötme steriliseerimismeetodile ja sellega seotud ettevaatusabinõudele.
rakukultuur
1. Steriliseerimismeetodid ja ettevaatusabinõud erinevate rakukultuuri söötmete jaoks
Rakukultuurisöötme steriliseerimismeetodid jagunevad autoklaavis steriliseerimiseks ja membraanfiltratsiooniga steriliseerimiseks. Erinevatel söötmetel võivad olla erinevad steriliseerimismeetodid nende erinevate toitainete tõttu.
Autoklaav
Mõnda söödet, näiteks MEM-i, saab autoklaavida, need söötmed ei sisalda üldiselt L-glutamiini ja naatriumvesinikkarbonaati ning lisatakse tavaliselt pärast söötme autoklaavimist. Lisaks võib L-glutamiini asemel kasutada kõrgsurveglutamaati (näiteks L-alanüül-L-glutamiini). Autoklaavitav sööde steriliseeritakse täielikult minimaalse toitainete kaoga 121 kraadi, 15 psi ja 15 minuti juures, ilma steriliseerimisaega pikendamata.
Enamik rakukultuuri söötmeid ei sobi autoklaavimiseks. Kuna kultiveerimissööde sisaldab sageli vitamiine, valke, polüpeptiide, kasvufaktoreid ja muid aineid, on need ained kõrgel temperatuuril või kiirgusega kokkupuutel altid denaturatsioonile või funktsiooni kadumisele, mistõttu ülalnimetatud vedelikud filtreeritakse ja steriliseeritakse enamasti bakterite eemaldamiseks. Filtreerimiseks ja steriliseerimiseks on saadaval palju filtermembraane ning nende materjalid on enamasti PES, nailon, polükarbonaat, tselluloosatsetaat, nitrotselluloos, PTFE, keraamika jne. Membraanfiltratsiooniga steriliseerimine on praegu laialt kasutatav ja mugav meetod. Sageli kasutatakse filtrimembraane, mille pooride suurus on 0,2 μm ja mõned neist kasutavad pooride suurust 0,1 μm. Võrreldes kõrgsurvefiltreerimisega on membraanidel eluiga ja need on kallimad, kuid kahjustavad vähem rakukultuurisöötme toitaineid.
2. Ettevaatusabinõud erinevate rakukultuuri söötmete säilitamisel
Üldjuhul ei tohiks vedelat rakukultuuri söödet külmutada temperatuuril -20, kuna sulatamise ajal võivad toitained sadestuda, mis mõjutab kultiveerimisefekti. Tavaolukorras tuleks seda hoida valguse eest kaitstult 2–8 kraadi juures. Enne kasutamist võtke see külmkapist välja ja asetage tasakaalustamiseks toatemperatuurile. Tavaline vedel sööde kehtib 6 kuni 12 kuud. Püüdke vältida vedela rakukultuuri söötme pikaajalist säilitamist. Selles sisalduv glutamiin laguneb aeglaselt koos säilitusaja pikenemisega. Kui rakkude kasv ei ole hea, võite kaaluda söötme glutamiinisisalduse testimist, et teha kindlaks, kas glutamiini lisada. . Kaubanduslikult saadaval vedelal rakukultuurisöötmel on konkreetne aegumiskuupäev. Pärast kuivpulbri rakukultuuri söötme kasutamist vedeliku valmistamiseks tuleb seda säilitada ka madalal temperatuuril (2–8 kraadi). Lisaks glutamiini kergele lagunemisele söötmes võivad temperatuuri tõustes laguneda või sadestuda ka teised söötme komponendid.