Meie töömeetodid, üksikasjad ja teoreetilised selgitused saavad teie tegevuse juhisteks, nagu toitainete lahuste ja rakukolbide paigutamine; steriliseerimisprotseduurid; Nende õige toimimise õppimiseks on vaja neile esimest korda tähelepanu pöörata.
Rakkude kasvatamine nagu laste kasvatamine
Rakud on tõesti haprad. Parim on seda kontrollida iga päev, et vältida ebatavalisi nähtusi, nagu veepuudus, süsinikdioksiid, elektrikatkestus ja ebapiisav temperatuur inkubaatoris. Samuti on vaja need õnnetused õigeaegselt lahendada, et vältida korduvatest katsetest põhjustatud suuremat valu. .
Head rakud tuleks õigeaegselt külvata
Rakke passeeritakse partiidena, nii et isegi kui üks partii ebaõnnestub, jääb varu. See ei pruugi olla lihtne keskmisele inimesele nagu viimane. Aga see on minu vere õppetund. Kui rakud olid saastunud, pühiti kogu armee minema. Tol ajal kahetsen, et ei kaitsnud seemet.
Igal rakul on oma omadused ja neid tuleks käsitleda erinevalt.
Rakud on samad, mis inimestel ja erinevatel rakkudel on erinevad kultuuriomadused. Olge kasvatamise protsessis ettevaatlik. Erinevad rakuliinid kasutavad erinevat söödet ja seerumit.
Näiteks silelihasrakud, mida ma kasvatan, on väga aktiivsed ja neile meeldib olla särtsakas. 2-3 päeva pärast on seal palju rahvast ja mulle ei meeldi eriti süüa ega juua. See on tõesti parim laps, mida kasvatada. Endoteelirakkudel ja silelihasrakkudel on sarnane isiksus, kuid nad on väga ebahügieenilised ja lohakad. Nendes on palju sekretoorseid rakke, mistõttu tuleb neid sageli vahetada ja pesta. RAW264.7 rakud on samuti väga rõõmsad ja väga söödavad. Neid on vaja sageli toita. Peavalu on see, et rakud aktiveeruvad kergesti. Hea, et pudel ja keskkond, kus neid kasvatatakse, on endotoksiinivabad, aga minul kui emal on raske neid rahuldada.
Tööks valmistumine enne treeningut
Sealhulgas kulumaterjalide käsitsemine, reaktiivide konfigureerimine, steriilsuse testimine jne.
Klaasnõude puhastamine. Klaasnõude (rakupudel, toitainelahust sisaldav pudel, väike penitsilliinipudel jne) puhul kasutage esmalt puhastamiseks pesupulbrit (pöörake tähelepanu surnud nurkadele) ja seejärel loputage. Leotage happelahuses rohkem kui 24 tundi, seejärel loputage happelahuse jääkide eemaldamiseks 10 korda puhta veega. Pudeleid jms loputamise ajal tugevalt loksutada. Seejärel leotatakse 24 tundi topeltdestilleeritud vees. Pärast kuivamist keerake see kokku ja kuivatage 160 kraadi juures 2 tundi.
Reaktiivi konfiguratsioon. Rakukultuuri vedelikuna võib üldiselt kasutada rohkem kui kaks korda destilleeritud vett. Ja pöörake tähelepanu pH väärtuse reguleerimisele.
Steriilsuse testimine. Kasutatakse peamiselt filtersteriliseerimist: nt trüpsiin, antibiootikumid, G-418 lahus, erinevad söötmed, naatriumpüruvaat, glutamiin jne. Mõnda saab autoklaavida: PBS, D-Hanki jne.
Reaktiive säilitatakse alikvootidena
Sealhulgas toitainelahus, pankreatiin, seerum jne.
Eriti oluline on seerum. Seerumit tuleb hoida temperatuuril -20 kraadi. Kui ühte pudelit ei saa korraga ära kasutada, võib 40-50ml jaotada steriilsetesse happega töödeldud pudelitesse või isegi säilitada penitsilliinipudelites. Üldiselt on tootja pakutav seerum steriilne ega vaja steriilset filtreerimist. Kui seerumis leitakse palju hõljuvat ainet, võib seerumit söötmele lisada ja koos filtreerida ning seerumit otse filtreerida ei tohi. (Tavatingimustes ei mõjuta rakukultuuri)
Pudelisseerumit tuleb sulatada järk-järgult: 4-kraadine külmkapp lahustatakse täielikult ja jagatakse seejärel pakenditesse. Lahustumisprotsessi ajal tuleb seda regulaarselt loksutada (olge ettevaatlik, et mitte tekitada õhumulle), et temperatuur ja koostis muutuksid ühtlaseks ning vähendaks sademete teket. Ärge sulatage otse -20 kraadist kuni 37 kraadini, kuna temperatuur muutub liiga palju, mis võib kergesti põhjustada valkude koagulatsiooni ja sademeid.
Kuumuse inaktiveerimine viitab täielikult sulanud seerumi kuumutamisele 56 kraadi juures 30 minutit. Kui veevanni temperatuur on tõusnud 56 kraadini, pange seerum sisse, oodake, kuni temperatuur tõuseb 56 kraadini ja lugege aega, üldiselt loksutage seda ühtlaselt umbes iga 5 minuti järel. Selle kuumtöötluse eesmärk on deaktiveerida komplemendi komponendid seerumis. Kui see pole vajalik, siis seda kuumtöötlust üldiselt ei tehta, kuna see põhjustab setete märkimisväärset suurenemist ja mõjutab seerumi kvaliteeti. Pöörake tähelepanu seerumi (ka erinevate partiide) muutmise mõjule rakkudele.
Tugev steriilsuse tunne
Enne katset steriliseeriti ülipuhast pinki 30 minuti jooksul UV-valguskiirgusega, aseptilist tööpinda pühiti 70-protsendilise etanooliga ja ultrapuhta pingi ventilaator lülitati mõneks minutiks sisse enne katseoperatsiooni alustamist. .
Laboratoorse rakukultuuri kohta lisateabe saamiseks klõpsake: http://www.shjasw.com/
