Rakukultuuri sööde on toitainete baasiks loomarakkude in vivo kasvukeskkonna kunstlikuks imiteerimiseks ning rakkude ellujäämise ja proliferatsiooni säilitamiseks in vitro. toitaine. Millised on rakukultuurisöötme kasutamisel levinud probleemid? Teeme analüüsi.
1. Puhversüsteemi valik ja rakukultuurisöötme pH muutus
Kuna enamiku rakkude optimaalne pH on vahemikus 7.{1}} kuni 7,4, võivad kõrvalekalded sellest vahemikust avaldada rakkude kasvule kahjulikku mõju. Erinevate rakkude pH-nõuded ei ole aga täpselt samad. Primaarsed kultiveeritud rakud taluvad üldiselt halvasti pH kõikumisi, samas kui lõpmatutel rakuliinidel on tugev tolerantsus. Seetõttu on primaarses kultuuris kultuurisöötmes olev puhversüsteem olulisem. Üldine rakukultuuri sööde kasutab tasakaalustatud soolasüsteemi, kuid erinevad söötmed või sama seeria söötmed kasutavad erinevaid tasakaalustatud soolasüsteeme. Näiteks 199-seeriatel ja MEM-seeriatel on Hanksi süsteemne sööde ja Earle'i süsteemne kultuur. alus. Mõned söötmed ei ole ülalmainitud tavapärased tasakaalustatud soolasüsteemid, näiteks RPMI1640 sööde, F12 sööde. MEM madala seerumi söötme tasakaalustatud soolasüsteem ei ole samuti tavaline tasakaalustatud soolasüsteem ning tasakaalustatud soolasüsteemi puhverdusvõime on tugevam kui tavapärase tasakaalustatud soolasüsteemi oma.
rakukultuur
Rakukultuuri ajal pH languse põhjuseid on palju. Kui rakud kasvavad väga kiiresti, langeb pH väärtus tavaliselt kiiresti, mida saab lahendada õigeaegse passaaži, läbilaskesuhte suurendamise või seerumi mahu vähendamisega. Lisaks võivad pH sageli kiiresti langeda ka kultuuripudeli korgi ülepingutamine, NaHCO3 puhversüsteemi ebapiisav puhverdusvõime, ebaõige soolakontsentratsioon söötmes, bakteriaalne, pärm- või seensaaste. Praegu saate selle lahendada järgmistel viisidel:
1) Suurendage NaHCO3 kontsentratsiooni söötmes või vähendage CO2 kontsentratsiooni inkubaatoris. Kui NaHCO3 sisaldus on vahemikus 20 g/L kuni 3,7 g/L, on vastav CO2 kontsentratsioon 5-10 protsenti;
2) Lülituge CO2-sõltumatule söötmele;
3) Keerake pudeli kork korralikult lahti. Lisage söötmele HEPES-puhver, et saada lõppkontsentratsiooniks 10-25 mM;
4) Kasutage Earle'i soolal põhinevat kultuurilahust CO2 kultuurikeskkonnas ja Hanksi soolast valmistatud kultuurilahust atmosfääris kultuurikeskkonnas;
5) Kui põhjus on saastumine, visake kultuur ära või steriliseerige antibiootikumidega.
2. Rakukultuurisöötmes kasutatakse tavaliselt mitmeid olulisi lisaaineid ja probleemid, millele tuleks kasutusprotsessis tähelepanu pöörata
Fenoolpunast kasutatakse rakukultuurisöötmes pH indikaatorina. Üldiselt saab söötme pH väärtust hinnata fenoolpunase indikaatorefekti järgi, kuid fenoolpunase sisaldus madala seerumi või seerumivaba rakukultuuri söötmes erineb tavalise rakukultuuri söötme omast ja seda ei saa jälgida. palja silmaga või pH väärtus määratakse empiiriliselt ning mõõtmiseks on soovitatav kasutada pH-meetrit. Fenoolpunasel ei ole tavaliselt olulist mõju seerumit sisaldavas rakukultuurisöötmes toodetud bioloogiliste saaduste kvaliteedile ja seda saab eemaldada ka puhastusmeetoditega, kuid fenoolpunane võib põhjustada seerumivabas rakukultuurisöötmes intratsellulaarse naatriumi/kaaliumi tasakaaluhäireid. , mis mõjutab rakkude kasvu.
rakukultuuri plaat
Naatriumvesinikkarbonaati kasutatakse peamiselt rakukultuurisöötme puhversüsteemina ja sellel on ka osmootse rõhu reguleerimise toime. Tavaliselt on toote kasutusjuhendis soovitatud naatriumvesinikkarbonaadi kogus standardne ja ohutu kogus, mis saadakse praktiliste kogemuste põhjal teaduslikul alusel. Erinevate rakuliinide (tüvede) tõttu võib aga sama rakk kohaneda erinevate keskkondadega (erinev raku taluvus jne), samuti on piirkondlikke erinevusi vee kvaliteedis jne, mida saab ka tegelikus tootmises veidi muuta. protsessi, kuid kasutamine Need, kellel on vaja teha vastavad testid (füüsikalis-keemilised ja rakuproduktsiooni testid jne).
HEPES on mitteioonne puhver, millel on hea puhverdusvõime pH vahemikus 7,2–7,4 ja mis võib olla mõnele rakkudele kõrge kontsentratsiooni korral toksiline. HEPES-puhvrit saab kasutada madala naatriumkarbonaadi tasemega (0,34 g/L), et kompenseerida täiendava HEPES-i lisamisest põhjustatud osmootse rõhu tõusu. Selle ohutu kontsentratsioonivahemik on 10–25 mmol/l.
Naatriumpüruvaati saab kasutada alternatiivse süsinikuallikana rakukultuuris ja kuigi rakud eelistavad süsinikuallikana glükoosi, võivad rakud ka glükoosi puudumisel naatriumpüruvaati metaboliseerida.
Glutamiin on lahuses väga ebastabiilne. Seda saab 4 kraadi juures 1 nädala jooksul lagundada 50 protsendini. Kõige parem on see kasutusel eraldi ette valmistada, hoida -20 kraadises külmikus ja lisada enne kasutamist rakukultuurisöötmesse.
