Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on bioteaduse laborites üks tuntumaid meetodeid.
PCR-plaadid on valmistatud esmaklassilisest plastikust kogutud proovide või tulemuste suurepäraseks käsitsemiseks ja analüüsimiseks.
Neil on õhukesed ühtlased seinad, mis tagavad täpse soojusülekande.
Reaalajas kasutamiseks valmistudes eraldatakse DNA või RNA väikesed fraktsioonid ja säilitatakse PCR-plaatidel.
PCR-plaadid on kuumtihendamisel väga tõhusad ja piiravad ka soojuse voolu.
Kuid kuna PCR-plaadid on tõhusad ja töökindlad, võivad need proovide töötlemisel esineda vigu ja ebatäpsusi.
Nii et kui olete huvitatud kvaliteetsete PCR-plaatide hankimisest. Parim on võtta ühendust usaldusväärse PCR-plaadi tootjaga. Sellega saate olla kindel, et saate parima hinna.
Allpool on toodud mõned ettevaatusabinõud reaktiivide või proovide saastumise vältimiseks ja ebatäpsete tulemuste vältimiseks.
Desinfitseerige keskkond
Lisandite olemasolust tingitud valed positiivsed või negatiivsed tulemused võivad panna teid tulemustes kahtlema.
Lisandid ja saasteained on erineval kujul, näiteks sõltumatu DNA või keemilised lisandid, mis lõppkokkuvõttes vähendavad reaktsiooni tõhusust ja tõhusust.
PCR-plaatide saastumise määra oluliseks vähendamiseks on palju võimalusi.
Steriliseeritud filtriotste kasutamine on veel üks kasulik viis vältida lisandite sattumist proovi pipeti kaudu.
Täiesti puhas seadmete komplekt, sealhulgas pipetid ja riiulid, on spetsiaalselt ette nähtud PCR-i kasutamiseks. See tagab ebaolulise lisandite või saasteainete edasikandumise laboris.
Kasutage saaste eemaldamiseks pipettidel, riiulitel ja pinkidel valgendit, etanooli.
Osakeste saastumise edasiseks vähendamiseks eraldage kõigile PCR-reaktsioonidele reserveeritud ruum.
Kasutage igal sammul puhtaid kindaid ja vahetage neid sageli.
PCR plaat
Kontrollige malli kontsentratsiooni ja puhtust.
PCR-iga proovide analüüsimiseks kasutatavate pinkide ja seadmete puhtust tuleks säilitada. Enne analüüsi ja töötlemist on oluline kontrollida proovide puhtust.
Tavaliselt võtab analüsaator arvesse DNA proovi kontsentratsiooni ja puhtuse taset.
Neelduvussuhe 260nm/280nm ei tohiks olla väiksem kui 1,8. Seejärel tuvastati lisandid, kasutades lainepikkusi vahemikus 230 nm kuni 320 nm.
Ühes näites tuvastati kaotroopsed soolad ja muud orgaanilised ühendid neeldumisel 230 nm. Samaaegselt tuvastada ja kontrollida hägusust DNA proovides neeldumise juures 320 nm juures.
Vältige PCR-plaatide ja toodete ülekoormamist
Kuigi on soovitav kasutada mitut toodet samaaegselt, võib see põhjustada PCR-plaatide ristsaastumise.
PCR-plaatide ülekoormamine erinevate toodetega on raiskav ja raskendab proovide tuvastamist.
Pidage arvestust PCR-reaktiivide alikvootide kohta
Pidevad külmutamise/sulatamise tsüklid ja sagedane alikvootide kasutamine võivad ümberkristallimise kaudu kahjustada PCR-reagente, ensüüme ja DNTP-sid.
Proovide analüüsiks ettevalmistamisel püüdke alati jälgida kasutatud alikvootide määra.
Eelistatud LIMS sobib paremini külmutatavate või sulatatavate reaktiivide ja proovide varude ja koguste kontrollimiseks.
Valige optimaalne lõõmutamistemperatuur.
Vale anniilimistemperatuuri valimine ja kasutamine on veel üks viis, kuidas PCR-i tulemused sisaldavad vigu.
Mõnikord ei lähe vastus plaanipäraselt. Eduka reaktsiooni soodustamiseks tuleb anniilimistemperatuuri alandada.
Temperatuuri alandamine suurendab aga valepositiivsete ja praimerite-dimeeride tõenäosust.
PCR-plaatide kasutamisel on oluline kinnitada sulamiskõvera analüüs, kuna see on hea indikaator õige lõõmutamistemperatuuri valimiseks.
Praimeri disainitarkvara aitab kujundada, pakkudes õiget lõõmutustemperatuuri, vähendades otseselt PCR-plaatide vigu.
pcr plaat
